反相C18 Flash色谱柱使用注意事项

之前我们讨论了很多关于反相色谱分离的各类实际操作案例和使用方案，但我们仍然收到很多的关于反相色谱柱使用问题的咨询，很多人对于什么是反相以及拥有了反相Flash色谱柱之后的使用和保存，仍然存在着很多疑问，今天我们为您列举了C18色谱柱在使用过程中的一些注意事项，希望对您的实验有所帮助。

由于C18色谱柱是通过C碳链进行修饰而来，因此几乎不会对样品有强烈保留，从而保证了其具有可重复使用的特性，为了保证其具有较长的寿命，反相Flash色谱柱的使用规则往往和常规的正相有所区别。

经典的反相硅胶表面的图示。C-18的烷基链键合在硅胶表面，增加了硅胶的疏水性。

使用前，色谱柱使用前需要使用100%有机溶剂(推荐乙腈)进行活化，低流速慢慢冲洗，这样可以使得C18链可以在整个有机溶剂体系中得到足够的伸展，使固定相能充分润湿、碳链舒展彻底，使色谱柱的性能达到好状态。

反相C18在使用之后，需要保存在100%有机溶剂当中(推荐乙腈)，切记不可吹干后保存，压干后容易使得C18键断裂，影响柱效和后期分离效果。

Flash C18色谱柱往往不可完全置于100% 水相当中，这样会使得C18链蜷缩，进而影响柱效。因此在起始比例设置方面，一般我们推荐从5% 或者10% 的有机相比例作为起始比例，请避免使用100%的纯水作为起始比例。因为在开始分离前，色谱柱保存在有机相当中，我们需要将100%有机相慢慢回调至起始比例，平衡一段时间后，才可开始正式分离。

一般反相 Flash C18色谱柱所支持的pH范围为：3-12之间，任何大于或者低于此数值的流动相体系都不有利于色谱柱寿命。

常规的两种反相C18流动相体系为：水-甲醇;水-乙腈。

在使用过程中的任何时候以及后期的保存，请不要将色谱柱干掉，一定要让其沉浸在溶剂之中。

流动相极性在进行转换时，跨度不宜过大，以免过度不匀，同时放热产生气泡影响分离、

在色谱柱使用完成后，需使用纯有机溶剂(乙腈或者甲醇)对对色谱柱进行冲洗，保证没有样品残留，如样品为离子型，则需要用10CV以上的溶剂冲洗，确保无残留。

若色谱柱处于长期闲置状态时，要将色谱柱彻底冲洗，建议冲洗10CV以上，保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液(如90%甲醇水，或者100%乙腈)中;

色谱柱在长时间使用中，压力会随着各种各样的样品的使用而形成缓慢上升的状况，如压力增大明显，可适时用大量甲醇或者乙腈进行冲洗，可使色谱柱恢复部分活性，提升一些柱效。/文：Biotage